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- Occupational exposure to Aflatoxin B1 in swine production and possible contamination sourcesPublication . Viegas, Susana; Veiga, Luísa; Figueiredo, Paula; Almeida, Ana; Carolino, Elisabete; Sabino, Raquel; Veríssimo, Cristina; Viegas, CarlaAlthough the adverse health consequences of ingestion of food contaminated with aflatoxin B1 (AFB1) are known, relatively few studies are available on the adverse effects of exposure in occupational settings. Taking this into consideration, our study was developed aiming to elucidate the possible effects of occupational exposure to AFB1 in Portuguese swine production facilities using a specific biomarker to assess exposure to AFB1. In total, 28 workers participated in this study, providing blood samples, and a control group (n = 30) was composed of subjects without any type of agricultural activity. Fungal contamination was also studied by conventional methods through air, surfaces, and new and used floor coverage. Twenty-one workers (75%) showed detectable levels of AFB1 with values ranging from <1 ng/ml to 8.94 ng/ml and with a mean value of 1.91 ± 1.68 ng/ml. In the control group, the AFB1 values were all below 1 ng/ml. Twelve different Aspergillus species were identified. Aspergillus versicolor presented the highest airborne spore counts (3210 CFU/m3) and was also detected in higher values in surfaces (>300 CFU/cm2). Data indicate that exposure to AFB1 occurs in swine barns, and this site serves as a contamination source in an occupational setting.
- Detection of cryptic species of Aspergillus with reduced susceptibility to antifungal agents in hospitalsPublication . Sabino, Raquel; Viegas, Carla; Veríssimo, Cristina; Carolino, Elisabete; Brandão, João; Parada, Helena; Martins, Carlos; Clemons, Karl V.; Stevens, David A.Invasive aspergillosis is a fungal infection caused by Aspergillus spp. affecting mainly the immunocompromised. The mortality rate may reach 85%. Aspergillus identification should be based on molecular methods as there are species morphologically similar but distinct at the molecular level (cryptic species), with variable antifungal susceptibility profiles.
- Exposure to particles and fungi in Portuguese swine productionPublication . Viegas, Susana; Carolino, Elisabete; Viegas, Carla; Sabino, Raquel; Veríssimo, CristinaA number of studies have shown that exposure to airborne dust and microorganisms can cause respiratory diseases in humans. Agricultural workers, such as pig farmers, have been found to be at high risk of exposure to airborne particles. The aim of this study was to detect contamination caused by particles and fungi in 7 swine farms located in Lisbon district, Portugal. Environment evaluations were performed during the winter season of 2011 with a portable direct-reading equipment (Lighthouse, model 3016 IAQ) and it was possible to obtain data concerning contamination caused by particles with 5 different sizes (PM0.5; PM1; PM2.5; PM5; PM10). To assess air contamination caused by fungi, air samples of 50 liters were collected us-ing a Millipore Air Tester (Millipore) by impaction method at a velocity of 140 L / minute and at one meter height, using malt extract agar supplemented with chloramphenicol (0.5%). Air sampling was also performed outside premises, since this is the place regarded as reference. All the collected samples were incubated at 27 ºC for 5 to 7 days. Results from particles’ contamination showed that higher values were connected with PM5 and PM10 sizes and that smaller particles exhibit lower contamination values. Concerning the fungal load of the analyzed swine, the highest obtained value was 4100 CFU/m3 and the lowest was 120 CFU/m3. Forty six different fungal species were detected in the air, being Aspergillus versicolor the most frequent species found (20.9%), followed by Scopulariopsis brevicaulis (17.0%) and Penicillium sp. (14.1%). Data gathered from this study corroborate the need of monitoring the contamination by particulate matter, fungi and their metabo-lites in Portuguese swine.
- Avaliação da exposição a fungos e partículas em explorações avícolas e suinícolas: estudoPublication . Santos, Carlos Silva; Viegas, Carla; Almeida, Ana; Clérigo, Anália; Veríssimo, Cristina; Carolino, Elisabete; Dias, Hermínia Brites; Malta-Vacas, Joana; Veiga, Luísa; Almeida-Silva, Marina; Sabino, Raquel; Viegas, Susana; Mateus, VanessaO projeto “Avaliação da Exposição a Fungos e Partículas em Explorações Avícolas e Suinícolas” contemplou um elevado número de colheitas ambientais e biológicas e respectivo processamento laboratorial, sendo apenas possível a sua concretização graças ao financiamento disponibilizado pela Autoridade para as Condições de Trabalho. Foi realizado um estudo transversal para avaliar a contaminação causada por fungos e partículas em 7 explorações avícolas e 7 explorações suinícolas. No que concerne à monitorização biológica, foram medidos os parâmetros espirométricos, utilizando o espirómetro MK8 Microlab, avaliada a existência de sintomas clínicos associados com a asma e outras doenças alérgicas, através de questionário adaptado European Community Respiratory Health Survey e, ainda, avaliada a sensibilização aos agentes fúngicos (IgE). Foram ainda adicionados dois objetivos ao estudo, designadamente: aferir a existência de três espécies/estirpes potencialmente patogénicas/toxinogénicas com recurso à biologia molecular e avaliar a exposição dos trabalhadores à micotoxina aflatoxina B1 por recurso a indicador biológico de exposição. Foram colhidas 27 amostras de ar de 25 litros nas explorações avícolas e 56 de 50 litros nas explorações suinícolas através do método de impacto. As colheitas de ar e a medição da concentração das partículas foram realizadas no interior e no exterior dos pavilhões, sendo este último considerado como local de referência. Simultaneamente, a temperatura e a humidade relativa também foram registadas. As colheitas das superfícies foram realizadas através da técnica de zaragatoa, tendo sido utilizado um quadrado de metal inoxidável de 10 cm de lado, de acordo com a International Standard ISO 18593 – 2004. As zaragatoas obtidas (20 das explorações avícolas e 48 das explorações suinícolas) foram inoculadas em malte de extract agar (2%) com cloranfenicol (0,05 g/L). Além das colheitas de ar e de superfícies, foram também obtidas colheitas da cama das explorações avícolas (7 novas e 14 usadas) e da cobertura do pavimento das explorações suinícolas (3 novas e 4 usadas) e embaladas em sacos esterilizados. Cada amostra foi diluída e inoculada em placas contendo malte extract agar. Todas as amostras foram incubadas a 27,5ºC durante 5 a 7 dias e obtidos resultados quantitativos (UFC/m3; UFC/m2; UFC/g) e qualitativos com a identificação das espécies fúngicas. Para a aplicação dos métodos de biologia molecular foram realizadas colheitas de ar de 300 litros utilizando o método de impinger com a velocidade de recolha de 300 L/min. A identificação molecular de três espécies potencialmente patogénicas e/ou toxinogénicas (Aspergillus flavus, Aspergillus fumigatus e Stachybotrys chartarum) foram obtidas por PCR em tempo real (PCR TR) utilizando o Rotor-Gene 6000 qPCR Detection System. As medições de partículas foram realizadas por recurso a equipamento de leitura direta (modelo Lighthouse, 2016 IAQ). Este recurso permitiu medir a concentração (mg/m3) de partículas em 5 dimensões distintas (PM 0.5; PM 1.0; PM 2.5; PM 5.0; PM10). Nas explorações avícolas, 28 espécies/géneros de fungos foram isolados no ar, tendo Aspergillus versicolor sido a espécie mais frequente (20.9%), seguida por Scopulariopsis brevicaulis (17.0%) e Penicillium sp. (14.1%). Entre o género Aspergillus, Aspergillus flavus apresentou o maior número de esporos (>2000 UFC/m3). Em relação às superfícies, A. versicolor foi detetada em maior número (>3 × 10−2 UFC/m2). Na cama nova, Penicillium foi o género mais frequente (59,9%), seguido por Alternaria (17,8%), Cladosporium (7,1%) e Aspergillus (5,7%). Na cama usada, Penicillium sp. foi o mais frequente (42,3%), seguido por Scopulariopsis sp. (38,3%), Trichosporon sp. (8,8%) e Aspergillus sp. (5,5%). Em relação à contaminação por partículas, as partículas com maior dimensão foram detectadas em maiores concentrações, designadamente as PM5.0 (partículas com a dimensão de 5.0 bm ou menos) e PM10 (partículas com a dimensão de 10 bm ou menos). Neste setting a prevalência da alteração ventilatória obstrutiva foi superior nos indivíduos com maior tempo de exposição (31,7%) independentemente de serem fumadores (17,1%) ou não fumadores (14,6%). Relativamente à avaliação do IgE específico, foi apenas realizado em trabalhadores das explorações avícolas (14 mulheres e 33 homens), não tendo sido encontrada associação positiva (p<0.05%) entre a contaminação fúngica e a sensibilização a antigénios fúngicos. No caso das explorações suinícolas, Aspergillus versicolor foi a espécie mais frequente (20,9%), seguida por Scopulariopsis brevicaulis (17,0%) e Penicillium sp. (14,1%). No género Aspergillus, A. versicolor apresentou o maior isolamento no ar (>2000 UFC/m3) e a maior prevalência (41,9%), seguida por A. flavus e A. fumigatus (8,1%). Em relação às superfícies analisadas, A. versicolor foi detetada em maior número (>3 ×10−2 UFC/m2). No caso da cobertura do pavimento das explorações suinícolas, o género Thicoderma foi o mais frequente na cobertura nova (28,0%) seguida por A. versicolor e Acremonium sp. (14,0%). O género Mucor foi o mais frequente na cobertura usada (25,1%), seguido por Trichoderma sp. (18,3%) e Acremonium sp. (11,2%). Relativamente às partículas, foram evidenciados também valores mais elevados na dimensão PM5 e, predominantes nas PM10. Neste contexto, apenas 4 participantes (22,2%) apresentaram uma alteração ventilatória obstrutiva. Destes, as obstruções mais graves encontraram-se nos que também apresentavam maior tempo de exposição. A prevalência de asma na amostra de trabalhadores em estudo, pertencentes aos 2 contextos em estudo, foi de 8,75%, tendo-se verificado também uma prevalência elevada de sintomatologia respiratória em profissionais não asmáticos. Em relação à utilização complementar dos métodos convencionais e moleculares, é recomendável que a avaliação da contaminação fúngica nestes settings, e, consequentemente, a exposição profissional a fungos, seja suportada pelas duas metodologias e, ainda, que ocorre exposição ocupacional à micotoxina aflatoxina B1 em ambos os contextos profissionais. Face aos resultados obtidos, é importante salientar que os settings alvo de estudo carecem de uma intervenção integrada em Saúde Ocupacional no âmbito da vigilância ambiental e da vigilância da saúde, com o objetivo de diminuir a exposição aos dois factores de risco estudados (fungos e partículas).
- New approach to study the real exposure to fungi in cork industry: nasal swabs mycobiota investigation coupled with screening on fungal resistance to azolesPublication . Viegas, Carla; Clérigo, Anália; Pacífico, Cátia; Faria, Tiago; Sabino, Raquel; Francisco, Mariana; Veríssimo, Cristina; Viegas, SusanaThe permanent contact with cork may lead to constant exposure to fungi, raising awareness as a potential occupational hazard in the cork industry.The presence of fungi belonging to the Penicillium glabrum complex has been associated with the development of respiratory diseases such as suberosis, one of the most prevalent diseases among workers from cork industries, besides occupational asthma. Azoles are used as pesticides but also the first line therapy in the treatment of Aspergillus infections; azole-resistance as been described as to have also an environmental source and is considered an emerging public health problem.The aim of this work was to characterize fungal distribution and to evaluate the presence of azole-resistant Aspergillus isolates in nose swab samples from the cork industry workers.
- The role of occupational Aspergillus exposure in the development of diseasesPublication . Sabino, Raquel; Veríssimo, Cristina; Viegas, Carla; Viegas, Susana; Brandão, João; Alves-Correia, Magna; Borrego, Luís-Miguel; Clemons, Karl V; Stevens, David A; Richardson, MalcolmAspergillus spp. have a high nutritional versatility and good growth on a large variety of construction materials. They also colonize soil or food, but decaying vegetation is their primary ecological niche. Therefore, exposure to fungi may occur at home, during hospitalization, during specific leisure activities, or at the workplace. The development of Aspergillus infections depends on the interplay between host susceptibility and the organism. Environments with high counts of fungal elements (conidia, hyphal fragments and others), high levels of bioarerosols, and elevated concentrations of mycotoxins or other volatile organic compounds should be considered as potential hazards, since they may present a risk to the exposed person. Rural tasks as well as work related to wood and food industries, poultries, swineries, waste handling plants, and other occupational environments involving contaminated organic material are among the ones posing higher respiratory risks to the workers. This paper presents a review of several studies related to occupational and indoor exposure to Aspergillus, potential health effects related to that exposure, and associated exposure assessment procedures.
- Occupational exposure to aflatoxin B1: the case of poultry and swine productionPublication . Viegas, Susana; Veiga, Luísa; Figueiredo, Paula; Almeida, Ana; Carolino, Elisabete; Sabino, Raquel; Veríssimo, Cristina; Viegas, CarlaAlthough there is an abundance of literature concerning the ingestion of food contaminated with aflatoxin B1 (AFB1), only a small number of studies explore mycotoxin exposure in occupational settings. Taking this into consideration, our study was developed with the intention of elucidating whether there is occupational exposure to AFB1 in Portuguese poultry and swine production facilities. A specific biomarker was used to assess exposure to AFB1. A total of 45 workers (34 from poultry farms; 11 from swine production facilities) participated in this study, providing blood samples. Additionally, a control group (n=30) composed of subjects without any type of contact with agricultural activity was considered. All participants signed a consent form and were provided with the study protocol. Eighteen poultry workers (58.6%) and six workers from the swine production facilities (54.5%) showed detectable levels of AFB1. In the control group, the AFB1 values were all below 1 ng/ml. No significant differences in AFB1 levels in serum between workers from poultry and swine farms were found. Poultry workers, however, showed the highest serum levels and a significant statistical difference between this group and the control group was found. Results suggest that exposure to AFB1 by inhalation occurs in both occupational settings representing an additional risk that needs to be recognised, assessed and prevented.
- Molecular characterization and antifungal susceptibility of Aspergillus collected in indoor settingsPublication . Simões, Daniela; Caetano, Liliana Aranha; Veríssimo, Cristina; Viegas, Carla; Sabino, RaquelThe exposure to Aspergillus conidia is an increased risk factor for the development of respiratory symptoms, such as asthma, in occupational and non-occupational settings. Aspergillus identification should be based on molecular methods as there are species with similar morphology but distinct at the molecular level (cryptic species), with variable antifungal susceptibility profiles. The aim of this study was to perform the molecular identification of Aspergillus species collected from different occupational and non-occupational settings. Due to the emergence of azole-resistance in A. fumigatus, the susceptibility of the collected Fumigati isolates was determined.