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Advisor(s)
Abstract(s)
ABSTRACT - Dry blood spots, appear to be a valuable option for sample collection for DNA extraction, especially in poorer communities with less access to medical care. Dry blood spots can be easily transported and ensure a non-invasive method of rapid blood collection which can be coupled with DNA extraction methods. However, the storage and transportation conditions (time and temperature) as well as sample type and volumes may affect DNA extraction efficiency and become a challenge. In this context, we aim to assess the effects on DNA extraction efficiency of six storage conditions (24 hours at 4 °C, 24 hours at room temperature, 24 hours at 50 °C, seven days at 4 °C, seven days at room temperature, and seven days at 50 °C) for dry blood spots with venous blood and capillary blood samples. To evaluate DNA extraction proficiency, under each of these conditions, we performed DNA extraction with the QIAamp® Blood Mini Kit and assessed DNA final concentrations and purity ratios, through UV spectrophotometry, with the aid of the Nanodrop® OneC. Statistical analysis was performed using a T-test in Microsoft® Excel. Overall, our data demonstrated that it is possible to extract a greater DNA quantity from capillary blood samples in dry blood spots, although with less purity than venous blood samples. Also, our results show that the assessed temperature and storage time (seven days) do not affect DNA extraction results.
RESUMO - As manchas de sangue seco parecem ser uma opção válida para a recolha de amostras para extração de DNA, especialmente em comunidades mais pobres e com menos acesso a cuidados médicos. As manchas de sangue seco podem ser facilmente transportadas e garantem um método não invasivo de colheita rápida que pode ser acoplado a métodos de extração de DNA. No entanto, as condições de armazenamento e transporte (tempo e temperatura), bem como o tipo e volumes de amostra podem condicionar a eficiência da extração de DNA e tornar-se um desafio. Neste contexto avaliaram-se os efeitos na eficiência da extração de DNA de seis condições de armazenamento (24 horas a 4 °C, 24 horas à temperatura ambiente, 24 horas a 50 °C, sete dias a 4 °C, sete dias à temperatura ambiente temperatura e sete dias a 50 °C) para amostras de sangue seco com sangue venoso e amostras de sangue capilar. Para avaliar a proficiência na extração de DNA, em cada uma dessas condições, realizou-se a extração de DNA com o QIAamp® Blood Mini Kit e avaliaram-se as concentrações finais e taxas de pureza do DNA, por meio de espectrofotometria UV com auxílio do Nanodrop® OneC. A análise estatística foi realizada por meio do teste T no Microsoft® Excel. Os resultados obtidos demonstraram que é possível extrair uma quantidade maior de DNA de amostras de sangue capilar em amostras de sangue seco, embora com menor pureza do que amostras de sangue venoso. Além disso, os resultados mostram que a temperatura avaliada e o tempo de armazenamento (sete dias) não afetam os resultados da extração de DNA.
RESUMO - As manchas de sangue seco parecem ser uma opção válida para a recolha de amostras para extração de DNA, especialmente em comunidades mais pobres e com menos acesso a cuidados médicos. As manchas de sangue seco podem ser facilmente transportadas e garantem um método não invasivo de colheita rápida que pode ser acoplado a métodos de extração de DNA. No entanto, as condições de armazenamento e transporte (tempo e temperatura), bem como o tipo e volumes de amostra podem condicionar a eficiência da extração de DNA e tornar-se um desafio. Neste contexto avaliaram-se os efeitos na eficiência da extração de DNA de seis condições de armazenamento (24 horas a 4 °C, 24 horas à temperatura ambiente, 24 horas a 50 °C, sete dias a 4 °C, sete dias à temperatura ambiente temperatura e sete dias a 50 °C) para amostras de sangue seco com sangue venoso e amostras de sangue capilar. Para avaliar a proficiência na extração de DNA, em cada uma dessas condições, realizou-se a extração de DNA com o QIAamp® Blood Mini Kit e avaliaram-se as concentrações finais e taxas de pureza do DNA, por meio de espectrofotometria UV com auxílio do Nanodrop® OneC. A análise estatística foi realizada por meio do teste T no Microsoft® Excel. Os resultados obtidos demonstraram que é possível extrair uma quantidade maior de DNA de amostras de sangue capilar em amostras de sangue seco, embora com menor pureza do que amostras de sangue venoso. Além disso, os resultados mostram que a temperatura avaliada e o tempo de armazenamento (sete dias) não afetam os resultados da extração de DNA.
Description
H&TRC authors gratefully acknowledge the FCT/MCTES national support through the UIDB/05608/2020 and UIDP/05608/2020. The authors acknowledge the institutional support given by Escola Superior de Tecnologia da Saúde de Lisboa – Instituto Politécnico de Lisboa.
Keywords
DNA extraction Dry blood spots Storage conditions Blood samples Extração de ADN Manchas de sangue seco Condições de armazenamento Amostras de sangue FCT_UIDB/05608/2020 FCT_UIDP/05608/2020
Citation
Alves A, Xisto A, Tomaz B, Brito M, Ribeiro E. Dry blood spots in filter paper: a valuable option for DNA extraction? Saúde & Tecnologia. 2023;(29):e729.
Publisher
Instituto Politécnico de Lisboa, Escola Superior de Tecnologia da Saúde de Lisboa