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- In situ near infrared spectroscopy monitoring of cyprosin production by recombinant Saccharomyces cerevisiae strainsPublication . Sampaio, Pedro; Sales, Kevin C.; Rosa, Filipa O.; Lopes, Marta B.; Calado, CecíliaNear infrared (NIR) spectroscopy was used to in situ monitoring the cultivation of two recombinant Saccharomyces cerevisiae strains producing heterologous cyprosin B. NIR spectroscopy is a fast and non-destructive technique, that by being based on overtones and combinations of molecular vibrations requires chemometrics tools, such as partial least squares (PLS) regression models, to extract quantitative information concerning the variables of interest from the spectral data. In the present work, good PLS calibration models based on specific regions of the NIR spectral data were built for estimating the critical variables of the cyprosin production process: biomass concentration, cyprosin activity, cyprosin specific activity, the carbon sources glucose and galactose concentration and the by-products acetic acid and ethanol concentration. The PLS models developed are valid for both recombinant S. cerevisiae strains, presenting distinct cyprosin production capacities, and therefore can be used, not only for the real-time control of both processes, but also in optimization protocols. The PLS model for biomass yielded a R2 = 0.98 and a RMSEP = 0.46 g dcw l−1, representing an error of 4% for a calibration range between 0.44 and 13.75 g dcw l−1. A R2 = 0.94 and a RMSEP = 167 U ml−1 were obtained for the cyprosin activity, corresponding to an error of 6.7% of the experimental data range (0–2509 U ml−1), whereas a R2 = 0.93 and RMSEP = 672 U mg−1 were obtained for the cyprosin specific activity, corresponding to an error of 7% of the experimental data range (0–11,690 U mg−1). For the carbon sources glucose and galactose, a R2 = 0.96 and a RMSECV of 1.26 and 0.55 g l−1, respectively, were obtained, showing high predictive capabilities within the range of 0–20 g l−1. For the metabolites resulting from the cell growth, the PLS model for acetate was characterized by a R2 = 0.92 and a RMSEP = 0.06 g l−1, which corresponds to a 6.1% error within the range of 0.41–1.23 g l−1; for the ethanol, a high accuracy PLS model with a R2 = 0.97 and a RMSEP = 1.08 g l−1 was obtained, representing an error of 9% within the range of 0.18–21.76 g l−1. The present study shows that it is possible the in situ monitoring and prediction of the critical variables of the recombinant cyprosin B production process by NIR spectroscopy, which can be applied in process control in real-time and in optimization protocols. From the above, NIR spectroscopy appears as a valuable analytical tool for online monitoring of cultivation processes, in a fast, accurate and reproducible operation mode.
- Técnica de pontas : análise do trabalho muscular, articular e postural, no 3ºano do Ensino Vocacional de Dança, na Academia de Música de Vilar do ParaísoPublication . Araújo, Carolina; Amorim, VeraO presente Relatório de Estágio, elaborado no âmbito do Mestrado em Ensino de Dança realizou-se na Academia de Música de Vilar do Paraíso, no Curso Vocacional de Dança, integrado na disciplina de Técnica de Dança Clássica (TDC), especificamente no trabalho de Pontas. A sua aplicação prática situou-se ao nível do 3º ano, no ano letivo de 2013/2014, com duas turmas, uma de estudo e uma de controlo. O principal objetivo foi identificar as dificuldades das alunas na iniciação ao trabalho de pontas, procurando perceber quais as condicionantes para uma adequada iniciação à técnica de Pontas, no âmbito da TDC, designadamente os principais problemas associados a esta técnica específica de dança. Pensaram-se detalhada e cuidadosamente os principais problemas que poderão interferir na subida para as pontas, pretendeu-se sinalizar as fragilidades mais comuns que impedem a subida às sapatilhas de pontas e aplicar exercícios de fortalecimento, especificamente ao nível postural e dos membros inferiores. Após uma observação do público-alvo e partindo das bases já existentes, traçámos um conjunto de estratégias pedagógicas e metodológicas a serem aplicadas na disciplina de TDC. Realizámos uma investigação qualitativa, na qual a investigação-ação foi um elemento central na recolha e tratamento de dados, suportado também por uma metodologia baseada na descrição e interpretação de factos que obrigaram a uma prática reflexiva que vertesse para a melhoria de todo o processo e logo a busca de eficácia do estágio que aqui relatamos. Pudemos constatar que no decorrer do estágio o plano de aulas estruturadas e realizadas foi bem recebido pelas alunas que se mostraram interessadas e permeáveis a novos conhecimentos. Todo o trabalho resultou eficazmente como se comprovará ao longo do relatório. Tornou-se ainda bastante evidente que o assunto abordado era completamente novo e desejado no contexto de aplicação, deixando claro que o restante contexto educativo se tornou assim mais simplificado.