Browsing by Author "Marques, Rita Simões"
Now showing 1 - 1 of 1
Results Per Page
Sort Options
- O papel dos cílios na resposta a níveis elevados de glucosePublication . Marques, Rita Simões; Carmona, Bruno; Soares, HelenaAs células eucariotas têm a capacidade de montar cílios primários na sua superfície, os quais são críticos para a sinalização e homeostasia celular. Disfunções ciliares estão na base do desenvolvimento de um conjunto de doenças designadas por ciliopatias. Recentemente, foi identificada uma nova variante no gene ALMS1 numa população de indivíduos obesos caracterizada por uma mutação de substituição c.5552C>T. O gene ALMS1 codifica para uma proteína que se localiza no centrossoma e no corpo basal, sendo importante para a montagem dos cílios. Mutações neste gene têm sido frequentemente associadas ao desenvolvimento da Síndrome de Alström, uma ciliopatia. Foram objetivos deste trabalho avaliar o papel dos cílios na resposta a níveis elevados de glucose em células hTERT-RPE-1. Foi também nosso objetivo avaliar se a via de sinalização Hippo, que está associada a cílios primários, seria afetada. Para isso, estudámos o impacto nos níveis celulares de um dos membros desta via, a proteína reguladora YAP. Pretendemos ainda avaliar como a variante do gene ALMS1 c.5552C>T influencia a montagem e função dos cílios, estabelecendo uma relação com o metabolismo da glucose e com os níveis e localização do YAP na célula. Para alcançar os nossos objetivos montámos um setup no qual as células hTERT-RPE-1 foram expostas a diferentes concentrações de glucose (5 mM, 25 mM, e 5 mM glucose+ 20 mM de manitol). A exposição à glucose ocorreu após a indução da montagem de cílios primários por remoção de soro, ou alternativamente, a montagem destas estruturas foi induzida após a exposição à glucose. Observámos que a presença de cílio primário, antes da suplementação com glucose, tem um impacto na regulação dos níveis da YAP, apresentando uma menor tendência para as células progredirem no ciclo celular como analisado por fluxocitometria. Adicionalmente, sabendo que a variante de histona γ-H2AX é um marcador de danos na molécula de DNA e de senescência celular, e que os níveis de YAP estão associados à regulação da senescência, estudámos a localização e a intensidade da marcação por imunofluorescência da γ-H2AX no setup acima descrito. Observámos que a presença dos cílios primários antes da exposição à glucose parece aproximar a expressão da γ-H2AX ao observado nas células controlo, mas também diminuir o tamanho e a granularidade celular. Resultados preliminares obtidos com um mutante de ALMS1 que gera uma proteína truncada criado por CRISPR/Cas 9 revelaram a ausência de microtúbulos acetilados, o que poderá ter impacto na ciliogénese. Este trabalho suporta a ideia de que o cílio primário funciona como um importante regulador da homeostasia em resposta a níveis elevados de glucose em células hTERT-RPE-1. Mostra ainda, que a truncagem da proteína ALMS1 pode condicionar a acetilação de microtúbulos, uma observação até aqui desconhecida.