Browsing by Author "Fernandes, Micaela Josefa Pedro"
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- Otimização de técnicas de processamento de sémen criopreservadoPublication . Fernandes, Micaela Josefa Pedro; Ladeira, Carina; Molina, Miguel GallardoIntrodução: A preservação de espermatozóides tem sido efectuada nos laboratórios de procriação medicamente assistida (PMA) com recurso ao SlowFreezing, técnica gold standard para a criopreservação de gâmetas masculinos. No entanto, esta técnica não está isenta de inconvenientes: a citotoxicidade dos crioprotectores, a morosidade de processamento e oneroso investimento dos aparelhos automatizados. Estudos científicos emergem e apontam para a técnica de vitrificação como uma alternativa à criopreservação de espermatozoides mediante Slow-Freezing, desviando-se das limitações desta técnica. Objetivo: Com recurso à técnica de vitrificação, o objetivo desta investigação é o de delinear um protocolo de vitrificação de rápida execução e de obtenção de taxas de recuperação de espermatozoides moveis, viáveis na utilização de técnicas de PMA. Metodologia: Este é um estudo experimental, de amostragem não probabilística e racional para análise das taxas de sobrevivência dos espermatozóides, após exposição de amostras a diferentes concentrações de soluções de sacarose, trealose e glicerol e após o processo de vitrificação ultrarrápida e aquecimento, avaliando diferentes suportes de vitrificação, tempos de exposição e temperaturas de aquecimento de modo a obter uma razão entre estas variáveis que permita desenhar um protocolo base para a vitrificação de espermatozóides. Os resultados foram tratados com Microsoft Excel®, no domínio da estatística descritiva e, para inferência estatística, com One-Way Anova na análise do efeito crioprotetor das diferentes soluções. Resultados: A solução de sacarose de 0,1M, apresenta entre as soluções a estudo e após exposição até 5 minutos, um melhor efeito crioprotetor até ao mergulho em azoto líquido em suporte de Cryotop®. O aquecimento do produto de vitrificação é exequível em gota de 5 µL de solução tamponada, a 37°C ou à temperatura ambiente desde que o aquecimento seja realizado em caixa e com sobreposição de óleo mineral. Conclusão: Este estudo revela que se é possível gradualmente transferir a abordagem de criopreservação no sentido da vitrificação de espermatozóides elaborando um protocolo de fácil execução, para utilização em tratamentos procedimentos de PMA.