Browsing by Author "Canteiro, Beatriz da Silva Malainho"
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- Efeitos dos extratos de Carica papaya na regulação transcricional e pós-transcricional da hemoglobina fetalPublication . Canteiro, Beatriz da Silva Malainho; Brito, Miguel; Gomes, Anita QuintalIntrodução: As hemoglobinopatias constituem um dos grupos de doenças monogénicas mais comuns no mundo. Atualmente, um dos tratamentos disponíveis consiste na indução farmacológica da hemoglobina fetal (HbF) através de vários compostos químicos, sendo o mais comum a hidroxiureia (HU). Contudo, o seu custo elevado em países subdesenvolvidos e o seu perfil de segurança limitam a utilização deste composto. Assim, é essencial a descoberta de novos compostos indutores de HbF com menos efeitos secundários e que sejam de fácil acesso, como é o caso dos compostos naturais (ex: Extrato de folha de Carica papaya L. e Quercetina). Objetivo: Avaliar o efeito do extrato metanólico das folhas de Carica papaya L. (EMFCP) e da Quercetina em células K562 (linha celular humana mortalizada de leucemia mielóide) ao nível da expressão dos genes HBG1 e HBG2, bem como de genes reguladores. Material e Métodos: A linha celular K562 foi exposta durante 24 horas ao EMFCP (0,5; 50 e 100 μg/mL) à Quercetina (0,2 e 20 μM) e à HU (25 μg/mL). Após a exposição aos compostos naturais quantificaram-se os efeitos da expressão génica a partir do RNA total, tendo-se recorrido à técnica de RT-qPCR. Analisaram-se os níveis de expressão dos genes das globinas (HBA, HBB, HBG1 e HBG2); genes reguladores da HbF (MYB, KLF1, BCL11A e BGLT3), para além de miRNAs envolvidos na regulação da HbF (miR-486-3p, miR-34a-5p, miR-210-5p, miR-32-5p e miR-96-5p), tendo como referências endógenas o GAPDH para os genes codificantes e o miR-426-3p para os miRNAs analisados. Resultados: A proliferação celular é afetada pela Quercetina a 20 μM, ao contrário da viabilidade que não é afetada por nenhum dos compostos nas concentrações estudadas. Através da análise transcricional, demonstrou-se que o EMFCP e a Quercetina apresentam efeitos opostos nos padrões de expressão dos genes HBB, MYB e KLF1, sugerindo-se que estes atuem por diferentes mecanismos de ação. Estes compostos também modulam a expressão de alguns miRNAs estudados, havendo uma correlação inversa, para algumas das concentrações utilizadas, com os valores de expressão dos potenciais genes alvo. Conclusão: O presente estudo preliminar sugere que o EMFCP e a Quercetina modulam a expressão da HbF, dos genes e de miRNAs reguladores em determinadas concentrações, constituindo assim uma potencial abordagem eficaz na terapêutica das β-hemoglobinopatias.
- Efeitos dos extratos de Carica papaya na regulação transcricional e pós-transcricional da hemoglobina fetalPublication . Canteiro, Beatriz da Silva Malainho; Brito, Miguel; Gomes, Anita Q.Introdução: As hemoglobinopatias constituem um dos grupos de doenças monogénicas mais comuns no mundo. Atualmente, um dos tratamentos disponíveis consiste na indução farmacológica da hemoglobina fetal (HbF) através de vários compostos químicos, sendo o mais comum a hidroxiureia (HU). Contudo, o seu custo elevado em países subdesenvolvidos e o seu perfil de segurança limitam a utilização deste composto. Assim, é essencial a descoberta de novos compostos indutores de HbF com menos efeitos secundários e que sejam de fácil acesso, como é o caso dos compostos naturais (ex: Extrato de folha de Carica papaya L. e Quercetina). Objetivo: Avaliar o efeito do extrato metanólico das folhas de Carica papaya L. (EMFCP) e da Quercetina em células K562 (linha celular humana mortalizada de leucemia mielóide) ao nível da expressão dos genes HBG1 e HBG2, bem como de genes reguladores. Material e Métodos: A linha celular K562 foi exposta durante 24 horas ao EMFCP (0,5; 50 e 100 μg/mL) à Quercetina (0,2 e 20 μM) e à HU (25 μg/mL). Após a exposição aos compostos naturais quantificaram-se os efeitos da expressão génica a partir do RNA total, tendo-se recorrido à técnica de RT-qPCR. Analisaram-se os níveis de expressão dos genes das globinas (HBA, HBB, HBG1 e HBG2); genes reguladores da HbF (MYB, KLF1, BCL11A e BGLT3), para além de miRNAs envolvidos na regulação da HbF (miR-486-3p, miR-34a-5p, miR-210-5p, miR-32-5p e miR-96-5p), tendo como referências endógenas o GAPDH para os genes codificantes e o miR-426-3p para os miRNAs analisados. Resultados: A proliferação celular é afetada pela Quercetina a 20 μM, ao contrário da viabilidade que não é afetada por nenhum dos compostos nas concentrações estudadas. Através da análise transcricional, demonstrou-se que o EMFCP e a Quercetina apresentam efeitos opostos nos padrões de expressão dos genes HBB, MYB e KLF1, sugerindo-se que estes atuem por diferentes mecanismos de ação. Estes compostos também modulam a expressão de alguns miRNAs estudados, havendo uma correlação inversa, para algumas das concentrações utilizadas, com os valores de expressão dos potenciais genes alvo. Conclusão: O presente estudo preliminar sugere que o EMFCP e a Quercetina modulam a expressão da HbF, dos genes e de miRNAs reguladores em determinadas concentrações, constituindo assim uma potencial abordagem eficaz na terapêutica das β-hemoglobinopatias.