ISEL - Engenharia Biomédica - Dissertações de Mestrado
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Browsing ISEL - Engenharia Biomédica - Dissertações de Mestrado by advisor "Brito, Rui Miguel Duque de"
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- Análise da expressão de microRNA moduladores da hemoglobina fetal em células expostas a extratos de Carica papayaPublication . Jacques, Filipa Carvalhao; Gomes, Anita Quintal; Brito, Rui Miguel Duque deIntrodução: As hemoglobinopatias são doenças sanguíneas genéticas resultantes de mutações e genes que codificam a hemoglobina, que perturbam o transporte de oxigénio e conduzem a diversas complicações de saúde. Para fazer face a estes desafios, é necessário aumentar os níveis de hemoglobina fetal (HbF) como abordagem terapêutica, mas o principal tratamento, a hidroxiureia (HU), enfrenta limitações relacionadas com o custo e a segurança, especialmente em países subdesenvolvidos. Para ultrapassar estas limitações, os investigadores estão a estudar alternativas naturais, como os extratos de folhas de Carica papaya, para aumentar a produção de HbF, esta abordagem natural promete minimizar os efeitos secundários indesejáveis associados aos tratamentos convencionais como a hidroxiureia. Objetivo: Avaliar o efeito de diferentes concentrações dos extratos metanólicos e aquosos nas folhas de Carica papaya em células K562 (linha celular humana mortalizada de leucemia mieloide) para avaliar o seu impacto na regulação da HbF Material e Métodos: Foi realizada uma investigação comparativa, na qual foram avaliados os efeitos de extratos aquosos e metanólicos derivados das folhas de Carica papaya (EMFCP e EAFCP, respetivamente) na indução da HbF e seus genes reguladores, tendo-se usado a exposição a HU como controlo positivo. As células K562 foram expostas a um período 24 horas a concentrações variáveis de EMFCP e EAFCP (0,05, 0,5 e 5 μg/mL). Após a exposição foram avaliados os efeitos da expressão génica a partir do RNA total, recorrendo à técnica de RT-qPCR. Analisaram-se os níveis de expressão dos genes das globinas (HBA, HBB e HBG1); genes reguladores da HbF (BCL11A, HIC2 e BGLT3), assim como os moduladores epigenéticos da globina (DNMT1, DNMT3B, HDAC1, HDAC2, HDAC3 e HDAC8), tendo como gene de referência o GAPDH. Foram ainda analisados os miRNAs envolvidos na regulação da HbF (miR-30a-3p, miR-29c-3p e o miR-148b-3p), tendo como referência o miR- miRNA-423-3p. Resultados: A proliferação celular e a viabilidade das células K562 permaneceram inalteradas em todas as concentrações para todos os compostos testados. Os compostos estudados não apresentam sinais de citotoxicidade. A análise transcricional revelou efeitos opostos aos esperados aquando da exposição, ao EMFCP (0,05 μg/mL e 0,5 μg/mL), uma vez que há uma regulação negativa dos genes das hemoglobinas, como observado nos perfis de expressão dos genes HBA e HBB e a indução da expressão do gene inibidor da HbF, o BCL11A. Estes resultados são reproduzidos em células expostas ao EAFCP (à concentração de 0,5 μg/mL) onde também se verifica o aumento da expressão deste regulador negativo da expressão da HbF, o BCL11A. Estes compostos exibiram também efeitos reguladores importantes sobre a expressão de miRNAs específicos, nomeadamente o miR-29c-3p e o miR-148b-3p. A expressão do miR-29c-3p diminuiu com a exposição ao EMFCP, EAFCP e HU, enquanto os seus genes alvo – o BCL11A e o DNMT3B – a sua expressão aumentou. A expressão do miR-148b-3p diminui quando exposto ao EMFCP, enquanto a do seu gene alvo, BCL11A aumentou, alinhando-se com o papel regulador negativo do miRNA. Conclusão: Este estudo introduz uma nova perspetiva sobre os compostos naturais como moduladores da HbF. Os resultados observados, envolvendo alterações nos genes reguladores da HbF, são promissores para investigação futura acerca de terapias da hemoglobina com base em compostos naturais.