Browsing by Author "Esteves, Madalena Fernandes"
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- Estabelecer culturas de organoides de intestino como modelo para estudar a expressão de genes da fase sexuada de Toxoplasma gondiiPublication . Esteves, Madalena Fernandes; Santos, Dulce Metelo Fernandes dos; Nolasco, SofiaOs organóides de intestino são estruturas celulares semelhantes ao epitélio intestinal in vivo, podendo ser utilizados para estudar protozoários como o Toxoplasma gondii. O T. gondii é um parasita intracelular obrigatório capaz de infetar várias espécies, incluindo humanos. O ciclo de vida do parasita apresenta duas fases – assexuada e sexuada. Esta última só ocorre no intestino dos felinos (hospedeiro definitivo). Recentemente um estudo utilizando organóides de intestino provou que são as altas concentrações de ácido linoleico no intestino dos felinos que despoletam o desenvolvimento sexuado deste parasita e que inibindo a enzima que o degrada é possível despoletar este desenvolvimento em células intestino de ratinho (Mus musculus). O nosso trabalho teve como principal objetivo estabelecer culturas de organóides de intestino de gato (Felis silvestres catus) e de ratinho para estudar a expressão de genes específicos da fase sexuada. Estabelecemos organóides de intestino de ratinho e monocamadas derivadas destes, confirmando a existência de enterócitos nestas estruturas. Inoculámos taquizoítos de T. gondii em monocamadas derivadas de organóides e em células HFF suplementadas com ácido linoleico e inibidor SC-26196, para testar a existência de desenvolvimento sexuado nas células de organóides de intestino de ratinho e em células distintas destas, na presença de elevadas concentrações de ácido linoleico e do inibidor da enzima que o degrada. Analisámos a existência de toxicidade causada nas células de organóides de intestino e em células HFF e nos taquizoítos por microscopia ótica de campo claro e por imunofluorescência indireta. Não observámos indícios de toxicidade. Analisámos a existência de desenvolvimento sexuado dos taquizoítos usando como marcadores deste desenvolvimento o aumento da expressão dos genes TgMob1 e TgLats. Não observámos aumento da expressão destes genes indicando que não houve desenvolvimento sexuado dos taquizoítos.