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Toxoplasma gondii é um parasita intracelular obrigatório que infeta a maioria dos animais, apresentando uma distribuição mundial. Este apresenta duas fases no seu ciclo de vida: uma fase assexual (que ocorre no interior do hospedeiro intermediário) e uma fase sexual (que ocorre no interior do hospedeiro definitivo). O parasita apresenta uma morfologia eucariótica clássica, sendo uma célula altamente polarizada. De entre as suas estruturas, o complexo apical é uma estrutura essencial para a patogenicidade e sobrevivência do parasita, uma vez que apresenta várias estruturas (como o conoide e os microtúbulos sub-peliculares) que apresentam uma elevada importância ao nível da invasão da célula do hospedeiro. O cofator B da tubulina (TBCB) é uma proteína envolvida nas vias de folding e degradação da tubulina, com mecanismos mal caracterizados em T. gondii, e em que a sua expressão pode estar relacionada com as taxas de invasão e saída da célula. Por este motivo, o grande objetivo é caracterizar o interactoma do TBCB e para isto iremos utilizar o sistema de BioID, que permite usar biotinilação por proximidade das proteínas, para determinar os mecanismos de ação do TBCB. Para isso, pretendemos com este trabalho produzir estirpes transgénicas de T. gondii que expressem BirA em fusão com TBCB (BirA_TBCB) e apenas BirA.
ABSTRACT - Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite infecting almost all warm-blooded animals, with a worldwide distribution. It presents two phases in its life cycle: an asexual phase (within the intermediate host) and a sexual phase (within the definitive host). The parasite exhibits a classic eukaryotic morphology, being a highly polarized cell. Among its structures, the apical complex is an essential structure for parasite pathogenicity and survival, as it presents several structures (as conoid and sub-pellicular microtubules) that play an important role in host cell invasion. Tubulin cofactor B (TBCB) is a protein involved in α-tubulin folding and degradation pathway, with a poorly characterized mechanism, that its expression might be related to invasion and egress levels. For this reason, we aim to characterize the TBCB interactome and with that objective we pretend to use the BioID method, which allows using proximity-dependent biotin identification of proteins, to determine TBCB mechanisms of action. For that, we aim to produce T. gondii transgenic strains expressing BirA in fusion with tubulin cofactor B and only BirA.
ABSTRACT - Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite infecting almost all warm-blooded animals, with a worldwide distribution. It presents two phases in its life cycle: an asexual phase (within the intermediate host) and a sexual phase (within the definitive host). The parasite exhibits a classic eukaryotic morphology, being a highly polarized cell. Among its structures, the apical complex is an essential structure for parasite pathogenicity and survival, as it presents several structures (as conoid and sub-pellicular microtubules) that play an important role in host cell invasion. Tubulin cofactor B (TBCB) is a protein involved in α-tubulin folding and degradation pathway, with a poorly characterized mechanism, that its expression might be related to invasion and egress levels. For this reason, we aim to characterize the TBCB interactome and with that objective we pretend to use the BioID method, which allows using proximity-dependent biotin identification of proteins, to determine TBCB mechanisms of action. For that, we aim to produce T. gondii transgenic strains expressing BirA in fusion with tubulin cofactor B and only BirA.
Description
Projeto "Characterization of the T. gondii TBCB interactome" (UID/CVT/00276/2019)
Mestrado em Tecnologias Moleculares em Saúde
Mestrado em Tecnologias Moleculares em Saúde
Keywords
Toxoplasma gondii Tubulin cofactor B TBCB BioID Projeto UID/CVT/00276/2019
Citation
Veva AM. Production of T. gondii transgenic strains to characterize the tubulin cofactor B interactome [dissertation]. Lisboa: Escola Superior de Tecnologia da Saúde de Lisboa/Instituto Politécnico de Lisboa; 2021.
Publisher
Instituto Politécnico de Lisboa, Escola Superior de Tecnologia da Saúde de Lisboa