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Authors
Advisor(s)
Abstract(s)
No presente trabalho foi executado o encapsulamento de células intactas, extracto
celular e amidase purificada (E.C. 3.5.1.4) da estirpe L10 e AI3 de Pseudomonas
aeruginosa num sistema de micelas invertidas composto pelo surfactante catiónico
brometo de tetradeciltrimetilamónio (TTAB) em heptano/octanol 80/20 (v/v).
O efeito do encapsulamento no sistema de micelas invertidas foi estudado avaliando a
reacção de transamidação para síntese de ácido acetohidroxâmico, catalisada pela
amidase expressa por ambas as estirpes.
No sistema de micelas invertidas fez-se variar conteúdo de água (w0) e foi estudado o
efeito na actividade enzimática e no rendimento de síntese de acetohidroxamato. Os
resultados demonstraram um aumento considerável de actividade específica e do
rendimento de síntese no sistema de micelas comparativamente ao meio convencional
aquoso, sugerindo que a metodologia de encapsulamento do biocatalisador demonstrou
potencialidades de utilização na síntese de hidroxamatos, compostos de elevada
importância e aplicabilidade. Na variação do conteúdo de água no sistema micelar
obteve-se uma curva em sino de actividade específica e de rendimento, com um pico de
actividade para w0 = 10, quer em células intactas, extracto celular e amidase purificada de ambas as estirpes. No caso da Pseudomonas aeruginosa L10 alcançaram-se
actividades específicas de 8, 11 e 103 UI/mg de proteína e rendimentos de 94, 99 e 40
% respectivamente para células intactas, extracto celular e amidase purificada. Quanto à Pseudomonas aeruginosa AI3 obtiveram-se, respectivamente, actividades específicas de 5, 9 e 163 UI/ mg de proteína e rendimentos de 66, 66 e 28 % para células intactas, extracto celular e amidase purificada. A estabilidade de armazenamento do biocatalisador no sistema de micelas invertidas e em solução aquosa a 24ºC foi avaliada.
Este estudo revelou um aumento do t1/2 no sistema de micelas face ao armazenamento
em solução aquosa convencional. No caso da Pseudomonas aeruginosa L10 os melhores resultados foram obtidos para a amidase purificada encapsulada revelando um
t1/2 de 17 dias. Quanto ao extracto celular da Pseudomonas aeruginosa AI3 demonstrou
um t1/2 de 26 dias quando encapsulado no sistema de micelas. O estudo das alterações
estruturais na amidase, de ambas as estirpes, devidas ao encapsulamento em micelas invertidas foi realizado recorrendo à espectroscopia de FTIR. Esta análise permitiu verificar que a amidase AI3 não alterou significativamente a sua estrutura secundária em micelas invertidas para diferentes w0. No entanto, no encapsulamento a sua estrutura secundária sofreu alterações face à estrutura do enzima em solução aquosa. A amidase L10 exibe apenas alterações estruturais face à estrutura que exibe em solução aquosa quando confinada em micelas para w0 3,5 e 4.
Description
Keywords
Amidase (E.C. 3.5.1.4) pseudomonas aeruginosa Ácido acetohidroxâmico Purificação Micelas invertidas FTIR Estabilidade de armazenamento Células intactase extracto celular